Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者令人满意缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次用到肝细胞自身特异性到用到1HG乳癌药理学疼痛的方面率在成人时期就有良好的描绘，多个肝细胞自身特异性乙型肝炎的成人中所有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的成人这一比重增高到84%。相比较来说之下，占药理学1HG乳癌一半以上的HG1HG乳癌的确诊机制还没有赢取更进一步的研究工作。

愈来愈多的人开始用作分期系统来判别1HG乳癌的方面：个躯在用到多种肝细胞自身特异性时进入第1阶段性，用到血糖异常时进入第2阶段性，用到疼痛时进入第3阶段性。一些多发肝细胞自身特异性乙型肝炎的个躯，在1期和2期，方面速度更慢，并拓展为确诊的1HG乳癌。我们在此之后描绘了一三组在首次测定到多种肝细胞自身特异性样本后至少10年无乳癌的快得多方面者，这三组病患者人数少，但特性非常明确。随后，我们发现肝细胞自身抗体特异性CD8+T细胞会反应在方面加速的病患者中所理论上不共存，但在近期确诊和长期共存的乳癌病患者中所很容易测定到。这似乎得出结论，与方面病患者相比较来说，这些病患者自身免疫反应的调节增强。

早期研究工作得出结论，尽管调节性T细胞会(Treg)数量正常，但乳癌病患者共存一些特性原因，其中所包含对IL-2的反应潜能增高。此外，乳癌病患者中所的物理现象CD4+T细胞会似乎对调节增添抵抗性，发挥为物理现象T细胞会的诱导减弱，自然激发的Treg和躯外激发的诱导Treg，以及抗体经历的CD4+T细胞会中所IL-2反应减弱。本研究工作的用以是描绘了CD4+调节性T细胞会(Treg)在群集极加速方面者中所的特性，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究工作是一项以人群相结合的垂直研究工作，在21岁以下确诊的病患者亲人中所检查1HG乳癌的危险因素。我们在此之后描绘了长期加速方面者的特性，他们始终保持多重肝细胞自身特异性乙型肝炎超过10年，但没有用到乳癌的药理学疼痛，更慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续始终保持无乳癌并愿意透过大量血液样本的加速方面者纳入T和B细胞会特性分析。在目前为止的研究工作中所，8名更慢方面者(SP三组)，中所位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁中间的肝细胞自身特异性乙型肝炎。所有的大多数人都处于1HG乳癌方面的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身特异性对某些抗体的乙型肝炎反应，然而，一名病患者仍然处于2期至少6年，但没有用到药理学疼痛，一名病患者被治疗为乳癌，该测试者72岁，在热带植物实验样本时，其HbA1c下降到53 mmol/mol(7%)，在的测试中所对该NADPH展开了单独风险评估。分离外周血单个核分裂细胞会(PBMCs)，有别于多表达式流式细胞会拳法和T细胞会诱导实验风险评估NADPH中所Treg的频带、表HG和特性。用作FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和回归)展开无指导聚类分析，风险评估Treg表HG。

结果：与健康NADPH相比较来说，来自更慢方面躯的梦境CD4+T细胞会的指导聚类说明了，激活的梦境CD4+ Treg频带增高，与持续性诱导的TNFR相关蛋白(GITR)理解增高有关。一名HbA1c下降的病患者与方面加速者和匹配的对照三组相比较来说，Treg谱略有不同。特性分析得出结论，与健康NADPH相比较来说，来自加速方面躯的Treg特异性的CD4+物理现象T细胞会诱导明显受损。发挥为对物理现象CD4+T细胞会CD25和CD134理解的诱导增高。

所示1 深入的表HG分析说明了，CD4+Treg亚HG在更慢方面队列中所增高。由FlowSOM作用于的Treg室，组织起来在来自所有NADPH的活CD4+CD45RA -细胞会上。根据上标物理解鉴定出10个元簇:梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)用作9个不同Treg上标作用于的10个元簇的MST。每个节点均是由一个协同(100个协同)，更大的元协同(10个元协同)在节点三组周围上色。每个节点中所的饼所示暗示单个上标的理解档次。(b)每个元聚类的热所示，以说明了整躯上标理解。(c, d)为HD三组(c)和SP三组(d)作用于所示，以及FlowSOM识别系统的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比较稀土元素为每个metacluster箱内相所示(稀土元素> 0.05%)确定为HD和SP三组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T细胞会(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T细胞会(l)。橙色边框均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩化验。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 用作CITRUS的预测模HG证实，Treg频带的增高是方面加速的所示标。分级奈斯(a - f)和葡萄分析(g-k)比较SP大多数人和匹配的HD大多数人在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群躯的均是由性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解展开分离，虚拟FlowSOM群躯。(b) HD(黑点)和SP(白斑)三组以及NADPHSP 606(橙色)中所CD25+ cd127的频带汇总所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯次子集的箱内相所示;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)棉花簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，记号突出的簇被识别系统为SP和HD队列中间的不同。(j)箱内相所示说明了了在SP(白斑)和HD(灰点)三组中所，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的相比较稀土元素(比重)。(k)直方所示说明了每个簇的表HG(粉红色)和Treg上标相比较理解与背景理解(浅蓝色);上列，线程Treg_3;上头一行，线程Treg_4。背景与所有其他簇中所上标的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon以此类推符号秩化验

所示3 与健康献血者相比较来说，方面加速者梦境treg的GITR增高。每个梦境CD4+T细胞会元簇(梦境T细胞会_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T细胞会;HLA-DR + GITR +梦境T细胞会;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)测定每个理解上标的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的理解热所示(sp606不包含在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中所所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)的FlowSOM GITR理解串联，说明了直方所示(c)和汇总所示(d)。Wilcoxon以此类推符号秩和化验，p< 0.07(橙色)所有NADPH包含，p< 0.05(浅蓝色)NADPHSP 606和匹配的HD不包含在测试中所。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中所GITR理解，从分级奈斯，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(橙色)串联，说明了直方所示(e)和汇总所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon以此类推符号秩化验

所示4 来自加速方面的CD4+ treg细胞会控制物理现象CD4+T细胞会的潜能增高。SP三组用浅蓝色的线和边框暗示，HD三组用白色的线和边框暗示，橙色的线/边框暗示NADPHsp606。用作CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被上标为CFSE, Treg按观察的比重起始。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，养成3当晚展开流式细胞会拳法测定。(a-d)与CD4+接收者者相比较应的treg养成(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE诱导比例(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱导比例。用作乙型肝炎对照(激活的响应细胞会分别为treg)计算诱导比例。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 物理现象CD4+T细胞会对加速方面的T细胞会再生的诱导更敏感。SP三组用浅蓝色的线和边框暗示，HD三组用白色的线和边框暗示，橙色的线/边框暗示NADPHsp606。用作CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上标，treg按观察的比重起始。用抗CD3 /28微珠再生细胞会，养成3当晚展开流式细胞会拳法(CD25反染)和细胞会因次子分析。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE诱导前年(b)。(c,d) CD25诱导前年(c)和CD134诱导前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在大一中所的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们给出的结论是，来自加速方面次子的再生梦境CD4+Treg在GITR理解中所赢取了扩展和丰富，强调了进一步研究工作Treg在1HG乳癌风险个躯中所的异质性的必要性。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28